RESUMO
BACKGROUND Didelphis spp. are a South American marsupial species that are among the most ancient hosts for the Trypanosoma spp. OBJECTIVES We characterise a new species (Trypanosoma janseni n. sp.) isolated from the spleen and liver tissues of Didelphis aurita in the Atlantic Rainforest of Rio de Janeiro, Brazil. METHODS The parasites were isolated and a growth curve was performed in NNN and Schneider's media containing 10% foetal bovine serum. Parasite morphology was evaluated via light microscopy on Giemsa-stained culture smears, as well as scanning and transmission electron microscopy. Molecular taxonomy was based on a partial region (737-bp) of the small subunit (18S) ribosomal RNA gene and 708 bp of the nuclear marker, glycosomal glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (gGAPDH) genes. Maximum likelihood and Bayesian inference methods were used to perform a species coalescent analysis and to generate individual and concatenated gene trees. Divergence times among species that belong to the T. cruzi clade were also inferred. FINDINGS In vitro growth curves demonstrated a very short log phase, achieving a maximum growth rate at day 3 followed by a sharp decline. Only epimastigote forms were observed under light and scanning microscopy. Transmission electron microscopy analysis showed structures typical to Trypanosoma spp., except one structure that presented as single-membraned, usually grouped in stacks of three or four. Phylogeography analyses confirmed the distinct species status of T. janseni n. sp. within the T. cruzi clade. Trypanosoma janseni n. sp. clusters with T. wauwau in a well-supported clade, which is exclusive and monophyletic. The separation of the South American T. wauwau + T. janseni coincides with the separation of the Southern Super Continent. CONCLUSIONS This clade is a sister group of the trypanosomes found in Australian marsupials and its discovery sheds light on the initial diversification process based on what we currently know about the T. cruzi clade.
Assuntos
Humanos , Trypanosoma , Trypanosomatina , Didelphis/classificação , Filogeografia , BrasilRESUMO
Na região amazônica a hipoendemicidade característica da doença de Chagas é conseqüência de uma transmissão vetorial contínua, embora esporádica, decorrente do contato eventual entre o homem e o vetor silvestre dentro das casas. Entretanto, existem também focos de transmissão intensa (quer sejam associados a atividades extrativistas no interior das matas ou à ingestão acidental de Trypanosoma cruzi em sucos de frutas), dispostos sobre este panorama hipoendêmico. Em todas estas situações, a transmissão da doença é promovida por triatomíneos silvestres nativos e, portanto, estratégias tradicionais de controle vetorial (utilizando inseticidas) são ineficazes. O desenvolvimento de estratégias novas destinadas especificamente à vigilância e controle de vetores silvestres depende de informações básicas, como identificação taxonômica acurada, correta delimitação das suas áreas de ocorrência e determinação de sua preferência ecológica. Informações desta natureza podem ser obtidas através de estudos filogenéticos, filogeográficos e genético-populacionais dos vetores. Rhodnius pictipes é o triatomíneo silvestre do gênero Rhodnius que ocupa a maior área geográfica na Amazônia. Sua distribuição se sobrepõe, em grande parte, à das quatro espécies crípticas que compõem R. robustus s.I.. Além disso, R. pictipes e R. robustus s.I. são congêneres e habitam os mesmos ecótopos silvestres. Desta forma, segundo o princípio da Biogeografia de Vicariância, esperar-se-ia que os mesmos eventos vicariantes que isolaram populações do estoque ancestral de R. robustus, levando à formação do complexo de espécies, tenham influenciado R. pictipes. Para testar esta hipótese, foram analisadas filogeneticamente amostras provenientes de dez subpopulações desta espécie provenientes de cinco países sul-americanos (Brasil, Colômbia, Bolívia, Equador e Guiana Francesa), utilizando 105 seqüências de um fragmento de 682pb do gene mitocondrial cyt b e 22 do espaçador ribossomal nuclear ITS-2. Tendo como base estas análises, foi possível confirmar que R. pictipes também representa um complexo parafilético de quatro espécies crípticas. Entretanto, contrariando o esperado, R. pictipes s.I. e R. robustus s.I. aparentemente não sofreram influências dos mesmos eventos vicariantes, uma vez que o padrão filogeográfico e o nível de divergência interespecífica determinado para R. pictipes s.I. não foram semelhantes aos já conhecidos para R. robustus s.I.. Os resultados filogenéticos (utilizando-se uma calibração recente do relógio molecular) e genético-populacionais possibilitaram a realização de inferências sobre a separação da linhagem pictipes na região amazônica (e os possíveis eventos geológicos e paleo-ecológicos relacionados), sobre o tempo em que as espécies da linhagem se separaram e como R. pictipes s.s. se expandiu por diversas áreas da região amazônica. As três espécies descobertas neste estudo se separam de R. pictipes s.s. durante o Mioceno Médio/Superior (entre o Serravalliano e o Messiniano, de 6,81 a 12,61 Maa), possivelmente devido às modificações naturais da região amazônica promovidas pelas incursões marinhas. A ampla distribuição geográfica de R. pictipes s.s. parece refletir uma expansão populacional súbita e secundária, ocorrida após a fragmentação das florestas tropicais úmidas em refúgios, durante um período interglacial do Pleistoceno Médio (0,180-0,295 Maa).